Figura 13.- Clonación de un gen de levadura por complementación genética. Una biblioteca genómica se prepara insertando en un vector apropiado, fragmentos de ADN obtenidos digiriendo con una enzima de restricción una preparación de ADN de una cepa silvestre de levadura. Si tenemos una doble mutante portadora de una mutación en el gen LEU2 y una segunda mutación que ocasione por ejemplo un fenotipo de auxotrofía que impida el crecimiento de la misma de medio mínimo, al transformarla con la biblioteca genómica, y sembrar en medio completo en ausencia de leucina, crecerán todas las levaduras que recibieron cualquier plásmido de nuestra biblioteca, ya que todos son portadores del gen LEU2. Posteriormente y utilizando la técnica de replicación en placa, se prueban las colonias en medios específicos en los que solamente crecerá alguna colonia que recibió el plásmido portador de un gen capaz de aliviar el fenotipo mutante, es decir ese plásmido portará simultáneamente el gen LEU2 y otro gen capaz de curar la auxotrofía que posee nuestra mutante. A partir de un cultivo de la cepa transformada se obtendrá el plásmido, a partir de este ADN se podrá caracterizar y secuenciar el gen silvestre clonado. [ Regresar ] |
